Иоланту томит неведомая ей доселе тоска. Она ищет утешение в беседе со своей кормилицей, Мартой, а ее подруги Бригитта и Лаура стараются развеселить ее песнями, приносят ей цветы. Марта поет своей питомице её любимую колыбельную, под звуки которой та засыпает.

Появляется Альмерик, оруженосец короля Рене; он объявляет привратнику замка, Бертрану, что вслед за ним сюда должен прибыть король со знаменитым врачом, который призван для исцеления Иоланты. Звуки труб возвещают приезд короля. Входит Рене в сопровождении мавританского врача Эбн-Хакиа. Король объясняет лекарю, что Иоланта с малолетства обручена с герцогом Бургундским Робертом и должна скоро вступить с ним в брак, но герцог не знает, что его невеста слепа, да и сама Иоланта не подозревает о своем недуге. Воспитав дочь в уединенном замке и окружив ее преданными людьми, король Рене под страхом смерти запретил открывать ей правду. Эбн-Хакиа возвещает, что исцеление Иоланты возможно только в том случае, если она сама страстно захочет обрести зрение. Короля терзает страх за судьбу дочери.