Действие I

В сердце Марии, юной дочери Василия Кочубея, вошла любовь. Но ее избранник – не молодой казак, а седовласый старик Мазепа. Бесконечно готова она слушать его тихие речи, смотреть в чудные очи… Напрасно влюбленный в нее Андрей говорит о своем чувстве – Мария не в силах противостоять всепоглощающей страсти. Кочубей с почетом принимает знатного гостя. Но стоит Мазепе попросить руки Марии – вспыхивает ссора. Кочубей возмущен самой мыслью о том, чтобы отдать любимую дочь старику. На шум сбегаются гости, с ними Мария, ее мать Любовь, Искра, Андрей; сердюки Мазепы и гвардия Кочубея. Ссора готова перерасти в вооруженное столкновение. Разгневанный Мазепа предлагает Марии выбирать между ним и родными. Девушка бросается в его объятия. Торжествующий Мазепа грозит Кочубею местью.

Родные и друзья Марию не простили: в доме Кочубея зреет заговор против Мазепы. Оказывается, гетман давно задумал изменить московской власти, и Кочубей пишет на него донос царю. Донос вызывается доставить в Москву пылающий ненавистью к Мазепе Андрей.

Действие II

Петр не поверил доносу и выдал Кочубея Мазепе. Наутро казнь. Мысль о том, что он умрет, не отомстив гетману, не дает Кочубею покоя. Появляется Орлик, верный слуга Мазепы, требуя, чтобы Кочубей указал спрятанные сокровища. С горькой иронией тот рассказывает о трех кладах: своей чести и чести дочери, украденных у него Мазепой; о мести, которая наполняет душу.
Мазепа один. Что будет с Марией, когда она узнает о казни отца? Но он тверд в своем решении: Кочубей должен погибнуть завтра.
Мария расстроена: ей кажется, что Мазепа охладел к ней. Чтобы рассеять ее ревнивые подозрения, старик открывает ей свои честолюбивые планы. Девушка в восторге – ее возлюбленный станет царем! Ее любовь и верность не знают границ, она готова пожертвовать даже отцом.
Но неожиданно появляется Любовь Кочубей. Только Мария может умолить Мазепу отменить казнь отца! Девушка в недоумении: какая казнь? Поняв, наконец, ужасную правду, она лишается чувств. Но мать настойчива – Мария должна спешить, ведь только она еще способна спасти Кочубея.
Поглазеть на казнь собралась многолюдная толпа. Женщины увещевают Пьяного казака, который поет разудалую песню. Но вот и повозка с осужденными. Кочубей и Искра возносят последнюю молитву. Казнь свершилась! Любовь и Мария появляются слишком поздно…

Действие III

Разрушенный дом Кочубеев. Появляется Андрей. Напрасно, пылая местью, искал он Мазепу в гуще битвы – изменник бежал. Знакомый дом вызывает в нем грустные воспоминания о Марии и потерянной любви.
Неожиданно показываются Мазепа и Орлик. Андрей бросается на Мазепу. Выстрел. Андрей смертельно ранен.
Появляется Мария: пережитые потрясения лишили ее рассудка. Мазепа пытается привести ее в чувство, но она не узнает его и боится – этот человек ей чужой.
Орлик торопит Мазепу; тот вынужден оставить Марию. Девушка склоняется над раненым Андреем, но не узнает его. Он умирает под колыбельную песню безумной Марии.